基于雷弗 TFD02-01 的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑定量添加應(yīng)用方案
上海儀器網(wǎng) / 2025-09-17
酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)（ELISA）是臨床診斷、食品安全檢測(cè)中常用的微量分析技術(shù)，其核心步驟（抗原包被、抗體孵育、酶標(biāo)試劑反應(yīng)、底物顯色）均需精準(zhǔn)控制試劑添加量（通常為 50-200μL）。手動(dòng)移液器添加易因操作人員手部抖動(dòng)、劑量判斷誤差導(dǎo)致試劑用量偏差，進(jìn)而影響吸光度檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性與準(zhǔn)確性。雷弗 TFD02-01 分體注射泵憑借 “μL 級(jí)精準(zhǔn)控量、分體式結(jié)構(gòu)適配微孔板、可編程多模式輸送” 的優(yōu)勢(shì)，成為 ELISA 實(shí)驗(yàn)試劑定量添加的標(biāo)準(zhǔn)化設(shè)備，以下為具體應(yīng)用方案。?
一、儀器與 ELISA 實(shí)驗(yàn)需求的適配性?
ELISA 實(shí)驗(yàn)對(duì)試劑添加的 “精度”“穩(wěn)定性”“兼容性” 要求嚴(yán)苛，雷弗 TFD02-01 的核心優(yōu)勢(shì)恰好契合場(chǎng)景需求：其一，流量精度達(dá) ±0.5%（RSD），最小輸送體積可至 1μL，完全滿足 ELISA 實(shí)驗(yàn)中酶標(biāo)抗體（如 100μL / 孔）、底物溶液（如 50μL / 孔）的微量定量需求，避免因劑量偏差導(dǎo)致的 “假陽(yáng)性”“假陰性” 結(jié)果；其二，采用 “控制器 + 執(zhí)行單元” 分體設(shè)計(jì) —— 控制器可放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)外側(cè)，執(zhí)行單元（注射泵本體）通過支架固定在微孔板上方，減少操作人員接觸微孔板時(shí)的干擾，同時(shí)適配 96 孔、384 孔等不同規(guī)格微孔板（通過調(diào)整執(zhí)行單元高度與移動(dòng)軌跡實(shí)現(xiàn)）；其三，支持 “單次定量”“連續(xù)滴加”“梯度輸送” 三種模式，可分別匹配 ELISA 不同步驟的試劑添加需求（如抗原包被用 “單次定量”，底物顯色用 “連續(xù)滴加”），且具備掉電記憶功能，可保存 10 組實(shí)驗(yàn)參數(shù)，避免重復(fù)設(shè)置。?
二、完整操作流程?
（一）前期準(zhǔn)備?
- 試劑與耗材適配：根據(jù) ELISA 實(shí)驗(yàn)需求選擇注射器（雷弗 TFD02-01 兼容 100μL-10mL 規(guī)格注射器，建議酶標(biāo)試劑用 1mL 注射器，底物溶液用 500μL 注射器），將注射器與專用軟管、針頭（選用 25G 微量針頭，避免試劑掛壁）組裝，確保接口無(wú)漏液；同時(shí)準(zhǔn)備待添加試劑（如辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體、TMB 底物溶液），提前平衡至室溫（25℃±2℃，避免溫度波動(dòng)影響試劑活性）。?
- 儀器調(diào)試與參數(shù)設(shè)定：接通控制器與執(zhí)行單元電源（DC24V），通過控制器觸摸屏進(jìn)行參數(shù)設(shè)置 ——①選擇 “單次定量” 模式（適用于抗原、抗體添加），設(shè)定 “目標(biāo)體積” 為 100μL（根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案調(diào)整）、“推注速度” 為 5μL/s（速度過快易產(chǎn)生氣泡，過慢影響效率）；②若為底物溶液添加，選擇 “連續(xù)滴加” 模式，設(shè)定 “每孔體積” 50μL、“孔間間隔時(shí)間” 2s（匹配微孔板移動(dòng)速度）；③通過 “校準(zhǔn)功能” 進(jìn)行體積校準(zhǔn)（用電子天平稱量注射器推出的去離子水重量，換算體積后修正儀器參數(shù)，確保精度）。?
- 設(shè)備安裝與定位：將執(zhí)行單元通過十字支架固定在微孔板孵育器上方，調(diào)整針頭高度（距微孔板表面 5mm，避免觸碰孔壁導(dǎo)致交叉污染），并通過控制器的 “手動(dòng)移動(dòng)” 功能，將針頭對(duì)準(zhǔn)微孔板第一列第一孔，完成初始定位。?
（二）試劑添加操作?
- 抗原包被階段：抽取 10mL 抗原溶液注入注射器，啟動(dòng) “單次定量” 模式，儀器自動(dòng)推注 100μL 抗原溶液至每孔，完成一列后執(zhí)行單元自動(dòng)移動(dòng)至下一列（移動(dòng)精度 ±0.1mm），全程無(wú)需人工干預(yù)；若需更換試劑（如從抗原切換為封閉液），按下 “暫停” 鍵，更換注射器后重啟，儀器自動(dòng)延續(xù)未完成的添加流程。?
- 酶標(biāo)抗體添加階段：由于酶標(biāo)抗體價(jià)格昂貴且需避免污染，需先通過 “排空功能” 排出注射器內(nèi)氣泡（防止空氣進(jìn)入微孔板），再抽取 5mL 酶標(biāo)抗體溶液；啟動(dòng)預(yù)設(shè)的 “梯度輸送” 模式（若實(shí)驗(yàn)需測(cè)試不同抗體濃度，可設(shè)定 50μL、100μL、150μL 三檔體積），儀器按設(shè)定梯度完成多組實(shí)驗(yàn)的試劑添加，同時(shí)自動(dòng)記錄每孔添加量（數(shù)據(jù)可通過 USB 導(dǎo)出至電腦）。?
- 底物顯色階段：底物溶液需避光且快速添加（避免提前顯色），選擇 “連續(xù)滴加” 模式并開啟 “避光罩”（部分執(zhí)行單元可選配），儀器以 2s / 孔的速度完成 96 孔底物添加（全程僅需 3 分鐘，較手動(dòng)添加效率提升 4 倍），添加結(jié)束后自動(dòng)提示，便于操作人員及時(shí)將微孔板轉(zhuǎn)移至酶標(biāo)儀檢測(cè)。?
三、關(guān)鍵控制要點(diǎn)?
- 氣泡排除：每次更換試劑或注射器后，必須執(zhí)行 “排空” 操作 —— 設(shè)定 “排空體積” 為 50μL，儀器快速推注排除針頭與軟管內(nèi)的氣泡，若仍有氣泡，需拆下注射器手動(dòng)彈擊管壁排氣，避免氣泡占據(jù)體積導(dǎo)致實(shí)際添加量不足。?
- 交叉污染防控：不同試劑添加后需更換針頭與軟管（或用去離子水沖洗 3 次，再用無(wú)水乙醇沖洗 1 次，烘干后復(fù)用）；微孔板定位時(shí)需確保針頭正對(duì)孔中心，禁止觸碰孔壁（若針頭沾染孔內(nèi)液體，需用無(wú)塵紙擦拭后再進(jìn)行下一列添加）。?
- 速度適配：根據(jù)試劑粘度調(diào)整推注速度 —— 低粘度試劑（如封閉液、洗滌液）可設(shè)為 8μL/s，高粘度試劑（如酶標(biāo)抗體、濃縮底物）需降至 3μL/s，防止因速度過快導(dǎo)致試劑飛濺出孔或產(chǎn)生氣泡。?
四、應(yīng)用價(jià)值與場(chǎng)景?
在臨床診斷實(shí)驗(yàn)室，該方案可提升新冠抗體檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)（如 CEA、AFP）的 ELISA 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性（RSD 從手動(dòng)添加的 5%-8% 降至 1%-2%），減少誤診風(fēng)險(xiǎn)；在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域（如三聚氰胺、農(nóng)藥殘留檢測(cè)），48 小時(shí)內(nèi)可完成 50 組 ELISA 實(shí)驗(yàn)的試劑添加，較手動(dòng)操作效率提升 3 倍，滿足批量檢測(cè)需求；在科研場(chǎng)景中，可編程的參數(shù)設(shè)置可支持多變量 ELISA 實(shí)驗(yàn)（如不同試劑濃度組合測(cè)試），為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性提供保障。?
綜上，雷弗 TFD02-01 分體注射泵通過精準(zhǔn)、高效、靈活的試劑定量添加能力，解決了 ELISA 實(shí)驗(yàn)中手動(dòng)操作的痛點(diǎn)，為微量分析實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化提供了可靠支撐。
