上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量離心機在生物樣品（全血）紅細(xì)胞分離中的應(yīng)用方案
上海儀器網(wǎng) / 2025-09-30
一、方案背景與目的?
在臨床檢驗、血液學(xué)研究等領(lǐng)域，全血中紅細(xì)胞分離是獲取血漿、白細(xì)胞等組分的關(guān)鍵步驟。上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量離心機具備最高 6000r/min 轉(zhuǎn)速、最大 500mL 離心杯容量及室溫～40℃可調(diào)溫控功能，可通過低速離心的密度差異實現(xiàn)紅細(xì)胞與其他血液組分的溫和分離，避免高速離心對細(xì)胞造成損傷。本方案旨在通過標(biāo)準(zhǔn)化操作，利用該設(shè)備高效分離全血中的紅細(xì)胞，獲得高純度、高活性的紅細(xì)胞沉淀與上層血漿，為后續(xù)血型鑒定、血紅蛋白檢測等實驗提供優(yōu)質(zhì)樣品。?
二、實驗原理?
全血由紅細(xì)胞（密度 1.090g/cm³）、白細(xì)胞（密度 1.075g/cm³）、血小板（密度 1.030g/cm³）及血漿（密度 1.025g/cm³）組成，各組分密度差異明顯。上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量離心機通過設(shè)定適宜的轉(zhuǎn)速（3000-4000r/min）與離心時間（10-15min），產(chǎn)生溫和的離心力，使密度較大的紅細(xì)胞逐漸沉降至離心管底部形成沉淀；白細(xì)胞與血小板形成中間薄層（ Buffy coat ）；血漿則漂浮于上層，從而實現(xiàn)各組分的分層分離，且低速條件可最大程度保留紅細(xì)胞的完整性與活性。?
三、實驗材料與設(shè)備?
1. 實驗材料?
- 生物樣品：新鮮全血（采集后 4h 內(nèi)使用，含 EDTA-K2 抗凝劑，每 10mL 全血加 100μL 抗凝劑）；?
- 試劑：無菌生理鹽水（0.85% NaCl，用于紅細(xì)胞洗滌）、pH7.4 磷酸鹽緩沖液（PBS，用于后續(xù)細(xì)胞活性檢測）；?
- 耗材：50mL 無菌離心管（適配 TLXJ-IIB 離心機轉(zhuǎn)子）、無菌移液管（10mL/20mL）、無菌吸頭、血細(xì)胞計數(shù)板、蓋玻片。?
2. 核心設(shè)備?
- 上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量離心機（配備 50mL×8 角轉(zhuǎn)子，提前校準(zhǔn)轉(zhuǎn)速與溫度）；?
- 超凈工作臺（保障無菌操作環(huán)境）、生物安全柜（處理全血樣品時使用）、光學(xué)顯微鏡（紅細(xì)胞活性觀察）、電子天平（離心管平衡稱重）。?
四、實驗操作流程?
1. 離心機預(yù)熱與參數(shù)設(shè)定?
- 打開 TLXJ-IIB 離心機電源，設(shè)定溫度為 25℃（室溫分離，若需低溫保護可設(shè)為 4℃），轉(zhuǎn)速 3500r/min，離心時間 12min，啟動預(yù)熱程序，待溫度穩(wěn)定后備用；?
- 檢查離心機轉(zhuǎn)子是否安裝牢固，離心腔內(nèi)部有無異物，確保設(shè)備處于正常狀態(tài)。?
2. 全血樣品準(zhǔn)備與離心管平衡?
- 在生物安全柜中，將新鮮全血輕輕顛倒混勻（避免劇烈振蕩導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂），按每管 20mL 的量分裝至 50mL 無菌離心管中；?
- 用電子天平對分裝后的離心管進行兩兩平衡，若重量差異超過 0.1g，用無菌生理鹽水微調(diào)至平衡，防止離心時轉(zhuǎn)子偏移產(chǎn)生安全隱患。?
3. 離心分離操作?
- 將平衡后的離心管對稱放入 TLXJ-IIB 離心機的角轉(zhuǎn)子中，確保離心管緊貼轉(zhuǎn)子內(nèi)壁，蓋緊離心機蓋；?
- 確認(rèn)參數(shù)無誤后，按下 “啟動” 鍵，設(shè)備按設(shè)定程序運行，離心過程中密切觀察設(shè)備運行狀態(tài)，若出現(xiàn)異常震動或噪音，立即按下 “急停” 鍵，排查問題后重新操作；?
- 離心結(jié)束后，待轉(zhuǎn)子完全停止轉(zhuǎn)動（轉(zhuǎn)速顯示為 0），打開離心機蓋，緩慢取出離心管，此時可見管內(nèi)樣品分層：底部為深紅色紅細(xì)胞沉淀（約占全血體積的 40%-50%），中間為乳白色薄層（白細(xì)胞與血小板），上層為淡黃色血漿。?
4. 紅細(xì)胞收集與洗滌?
- 在超凈工作臺中，用無菌移液管緩慢吸取上層血漿（避免觸碰中間薄層），轉(zhuǎn)移至新的離心管中備用；?
- 向剩余的紅細(xì)胞沉淀中加入 20mL 無菌生理鹽水，輕輕吹打混勻，制成紅細(xì)胞懸液；?
- 按照步驟 2-3 的方法，再次用 TLXJ-IIB 離心機以 3000r/min 轉(zhuǎn)速離心 10min，棄去上層洗滌液，重復(fù)洗滌 2 次，去除殘留的血漿蛋白與抗凝劑，獲得純化的紅細(xì)胞沉淀。?
五、關(guān)鍵注意事項?
- 轉(zhuǎn)速與時間控制：轉(zhuǎn)速不可過高（超過 4000r/min 易導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂），離心時間不可過長（超過 15min 會增加白細(xì)胞污染風(fēng)險），需嚴(yán)格遵循 3500r/min、12min 的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)；?
- 無菌操作要求：全血樣品處理全程需在生物安全柜或超凈工作臺中進行，離心管、移液管等耗材需提前滅菌，避免樣品污染；?
- 離心管平衡：離心管平衡誤差必須控制在 0.1g 以內(nèi)，TLXJ-IIB 離心機雖具備一定的平衡容錯能力，但失衡會縮短轉(zhuǎn)子使用壽命，甚至引發(fā)設(shè)備故障；?
- 樣品時效性：全血樣品需在采集后 4h 內(nèi)完成分離，超過時間易導(dǎo)致紅細(xì)胞活性下降，影響后續(xù)實驗結(jié)果。?
六、結(jié)果驗證與分析?
- 純度驗證：取 10μL 純化后的紅細(xì)胞沉淀，用 PBS 稀釋后滴加至血細(xì)胞計數(shù)板，在光學(xué)顯微鏡下觀察，若視野中僅見紅細(xì)胞（呈雙凹圓盤狀），無明顯白細(xì)胞或雜質(zhì)，說明純度達標(biāo)（紅細(xì)胞純度≥98%）；?
- 活性驗證：取少量紅細(xì)胞懸液，加入 0.1% 臺盼藍(lán)染液染色，顯微鏡下觀察，若藍(lán)色死細(xì)胞比例低于 5%，表明紅細(xì)胞活性良好；?
- 回收率計算：通過離心前后紅細(xì)胞體積對比，計算回收率，TLXJ-IIB 離心機分離的紅細(xì)胞回收率通?？蛇_ 90% 以上，若回收率低于 80%，需檢查離心參數(shù)或樣品處理過程是否存在問題。?
