在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，核酸電泳后的凝膠觀察是判斷實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié) —— 需通過(guò)紫外透射儀激發(fā)染色劑熒光，清晰識(shí)別核酸條帶的大小、純度與濃度，為后續(xù)克隆、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。其林貝爾 GL-312 紫外透射儀憑借 “三波長(zhǎng)適配、高透光載物臺(tái)、安全防護(hù)設(shè)計(jì)”，成為核酸凝膠觀察的主流設(shè)備。本指南將從儀器特性、操作流程、結(jié)果分析到維護(hù)安全，提供全流程實(shí)戰(zhàn)指導(dǎo)，幫助研究者規(guī)避操作誤區(qū)，提升實(shí)驗(yàn)效率與數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
其林貝爾臺(tái)式紫外透射儀GL-312 的設(shè)計(jì)圍繞 “精準(zhǔn)激發(fā)、清晰觀察、安全防護(hù)” 展開(kāi)，核心特性直接匹配核酸電泳的實(shí)驗(yàn)需求，是實(shí)戰(zhàn)操作的基礎(chǔ)：
• 三波長(zhǎng)紫外光源：配備 254nm、302nm、365nm 三種波長(zhǎng)，可根據(jù)染色劑類型靈活選擇 ——254nm 適用于 EB（溴化乙錠）染色（激發(fā)效率高，條帶清晰），302nm 適配 SYBR Green、GoldView 等安全染色劑（減少核酸損傷，適合后續(xù)回收實(shí)驗(yàn)），365nm 用于低濃度核酸樣品（降低背景熒光，提升條帶對(duì)比度）；
• 高透光石英載物臺(tái)：載物臺(tái)采用高純度石英玻璃，透光均勻性誤差≤5%，避免因透光不均導(dǎo)致局部條帶模糊；載物臺(tái)尺寸為 200×150mm，可容納標(biāo)準(zhǔn) 10×10cm、10×15cm 凝膠，滿足多數(shù)電泳實(shí)驗(yàn)需求；
• 雙重安全防護(hù)：內(nèi)置紫外防護(hù)蓋（透光率＜0.1%），關(guān)閉時(shí)自動(dòng)開(kāi)啟光源，開(kāi)啟時(shí)立即斷電，防止紫外泄漏灼傷皮膚與眼睛；儀器側(cè)面配備觀察窗口（帶紫外濾鏡），無(wú)需開(kāi)蓋即可初步判讀，進(jìn)一步降低暴露風(fēng)險(xiǎn)。
GL-312 的操作需遵循 “準(zhǔn)備 - 開(kāi)機(jī) - 選波長(zhǎng) - 放凝膠 - 觀察 - 記錄” 的標(biāo)準(zhǔn)化流程，每個(gè)環(huán)節(jié)的細(xì)節(jié)把控直接影響觀察結(jié)果：
1. 凝膠預(yù)處理：完成核酸電泳后，取出凝膠（若為垂直電泳，需先剝離膠板）—— 若用 EB 染色，需將凝膠浸泡于 0.5μg/mL EB 溶液中，室溫避光染色 10-15 分鐘（根據(jù)凝膠厚度調(diào)整，1mm 厚凝膠染 10 分鐘，2mm 厚染 15 分鐘），染色后用去離子水沖洗 1-2 次，去除表面殘留 EB，減少背景熒光；若為預(yù)制染色凝膠（如加 SYBR Green 的凝膠），可直接使用，無(wú)需額外染色；
2. 安全防護(hù)準(zhǔn)備：穿戴防紫外護(hù)目鏡（波長(zhǎng)覆蓋 200-400nm）、一次性手套（避免手部接觸染色劑與凝膠，防止污染），若需長(zhǎng)時(shí)間觀察，建議搭配防紫外圍裙，確保全身防護(hù)；
3. 儀器檢查：接通電源前，檢查載物臺(tái)表面是否潔凈（無(wú)殘留染色劑、凝膠碎片），若有污漬用 75% 乙醇擦拭干凈；檢查紫外防護(hù)蓋是否閉合順暢，避免因卡頓導(dǎo)致防護(hù)失效。
1. 接通電源與開(kāi)機(jī)：將儀器電源插頭插入接地插座，按下主開(kāi)關(guān)，屏幕顯示波長(zhǎng)選擇界面（254nm、302nm、365nm 圖標(biāo)閃爍）；
2. 選擇波長(zhǎng)：根據(jù)染色劑類型按下對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)按鍵 —— 例如 EB 染色按 “254nm”，SYBR Green 染色按 “302nm”，按鍵燈亮表示波長(zhǎng)已選定；若需切換波長(zhǎng)，需先按下 “停止” 鍵，再重新選擇；
3. 調(diào)節(jié)亮度（可選）：儀器配備亮度調(diào)節(jié)旋鈕（0-100%），常規(guī)樣品調(diào)至 50%-70% 即可；若為低濃度核酸（如 PCR 產(chǎn)物＜10ng/μL），可將亮度調(diào)至 80% 以上，增強(qiáng)熒光信號(hào)；若背景熒光過(guò)強(qiáng)，可適當(dāng)調(diào)低亮度，提升條帶對(duì)比度。
1. 放置凝膠：打開(kāi)紫外防護(hù)蓋，將預(yù)處理后的凝膠平置于載物臺(tái)中央，確保目標(biāo)觀察區(qū)域（如加樣孔至凝膠底部）完全覆蓋透光區(qū)，避免凝膠邊緣超出載物臺(tái)導(dǎo)致局部無(wú)法觀察；輕輕按壓凝膠，排除凝膠與載物臺(tái)間的氣泡（氣泡會(huì)遮擋紫外光，導(dǎo)致局部條帶缺失）；
2. 閉合防護(hù)蓋與觀察：關(guān)閉防護(hù)蓋，光源自動(dòng)開(kāi)啟，通過(guò)側(cè)面觀察窗口初步判讀 —— 若條帶清晰，可直接記錄條帶位置；若需詳細(xì)分析，可連接配套的凝膠成像系統(tǒng)（如其林貝爾 GL-6000 成像儀），設(shè)置曝光時(shí)間（常規(guī) 50-500ms，EB 染色樣品曝光 100-200ms，SYBR Green 樣品曝光 200-300ms），拍攝圖像后保存至電腦；
3. 關(guān)機(jī)與凝膠處理：觀察完成后，按下 “停止” 鍵，關(guān)閉主開(kāi)關(guān)，拔掉電源；取出凝膠 —— 若為 EB 凝膠，需放入專用有害廢物桶（EB 為強(qiáng)致癌物，不可隨意丟棄）；若為安全染色凝膠，可按普通實(shí)驗(yàn)垃圾處理。
其林貝爾臺(tái)式紫外透射儀GL-312觀察到的條帶信息需結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆治?，核心判讀要點(diǎn)如下，幫助研究者快速判斷核酸質(zhì)量：
將樣品條帶與標(biāo)準(zhǔn)核酸 Marker（如 DL2000、DL10000）的已知條帶對(duì)比，通過(guò)遷移距離判斷片段大小 —— 例如 DL2000 Marker 包含 100bp、250bp、500bp、750bp、1000bp、2000bp 條帶，若樣品條帶遷移距離介于 500bp 與 750bp 之間，說(shuō)明目標(biāo)片段大小約 600-650bp；若條帶遷移過(guò)快（小于最小 Marker 條帶），可能是引物二聚體或小片段核酸；若遷移過(guò)慢（大于最大 Marker 條帶），可能是基因組 DNA 污染或核酸聚合體。
• 合格樣品：僅出現(xiàn)目標(biāo)大小的單一清晰條帶，無(wú)彌散帶（涂抹狀條帶）、非特異性條帶（目標(biāo)外的多余條帶）—— 例如 PCR 產(chǎn)物觀察到單一目標(biāo)條帶，說(shuō)明擴(kuò)增特異性好，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；
• 不合格樣品：若出現(xiàn)彌散帶，可能是核酸降解（如 RNA 電泳出現(xiàn)彌散帶，說(shuō)明 RNA 完整性差）或電泳條件不當(dāng)（如電壓過(guò)高、凝膠濃度不合適）；若出現(xiàn)非特異性條帶，可能是引物設(shè)計(jì)不合理、PCR 退火溫度過(guò)低，需優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件后重新操作。
通過(guò)條帶亮度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比，初步判斷核酸濃度 —— 例如將 100ng/μL 的標(biāo)準(zhǔn) DNA 條帶作為參照，若樣品條帶亮度與標(biāo)準(zhǔn)品相當(dāng)，濃度約為 80-120ng/μL；若亮度是標(biāo)準(zhǔn)品的 2 倍，濃度約為 180-220ng/μL；若條帶微弱（需高亮度才能觀察到），濃度可能低于 10ng/μL，需通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)一步定量。
GL-312 的安全操作與定期維護(hù)是實(shí)戰(zhàn)應(yīng)用的重要環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到儀器性能與操作者安全：
• 安全禁忌：嚴(yán)禁在防護(hù)蓋開(kāi)啟狀態(tài)下開(kāi)啟光源，即使佩戴護(hù)目鏡，也不可直視紫外光（短期暴露可能導(dǎo)致眼睛紅腫、皮膚灼傷，長(zhǎng)期暴露增加皮膚癌風(fēng)險(xiǎn)）；EB 染色凝膠需單獨(dú)處理，不可與普通垃圾混放，載物臺(tái)若沾染 EB，需用 75% 乙醇反復(fù)擦拭，再用去離子水清潔；
• 定期維護(hù)：每月檢查紫外燈管亮度 —— 若相同波長(zhǎng)、相同亮度下，條帶清晰度明顯下降（如原本清晰的條帶變得模糊），說(shuō)明燈管老化，需及時(shí)更換（建議燈管使用壽命≤2000 小時(shí)）；每季度清潔載物臺(tái)石英玻璃，用鏡頭紙蘸無(wú)水乙醇輕輕擦拭，去除表面污漬，避免劃傷玻璃影響透光性；
• 長(zhǎng)期存放：若長(zhǎng)期不用（超過(guò) 1 個(gè)月），需切斷電源，用防塵罩覆蓋儀器，存放于干燥通風(fēng)環(huán)境（濕度≤60%，溫度 10-30℃），避免潮濕導(dǎo)致電路故障。
其林貝爾臺(tái)式紫外透射儀GL-312通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化操作與清晰的結(jié)果呈現(xiàn)，為核酸電泳實(shí)驗(yàn)提供可靠的觀察支撐。掌握本指南的實(shí)戰(zhàn)要點(diǎn) —— 從根據(jù)染色劑選對(duì)波長(zhǎng)，到精準(zhǔn)判讀條帶大小、純度與濃度，再到嚴(yán)格遵循安全維護(hù)規(guī)范，可幫助研究者快速獲取準(zhǔn)確的凝膠數(shù)據(jù)，減少重復(fù)實(shí)驗(yàn)，為后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。無(wú)論是科研實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)，還是教學(xué)中的實(shí)驗(yàn)演示，GL-312 都能憑借其適配性與穩(wěn)定性，成為核酸凝膠觀察的高效工具。
