3.1 方案設(shè)計(jì)思路
本方案以“精準(zhǔn)成像-場(chǎng)景適配-定量可靠”為核心設(shè)計(jì)原則，結(jié)合WD-9433A多功能凝膠成像系統(tǒng)的技術(shù)參數(shù)（如激發(fā)波長(zhǎng)范圍254nm-635nm、CCD分辨率500萬像素、動(dòng)態(tài)范圍4.8OD等）與不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景的成像需求，從樣本預(yù)處理、設(shè)備參數(shù)調(diào)試、圖像分析方法三個(gè)維度構(gòu)建應(yīng)用方案：
- 樣本適配預(yù)處理：針對(duì)不同類型樣本的光學(xué)特性，制定專屬預(yù)處理流程。核酸凝膠樣本采用高純度染色劑（如GoldView、EB替代染料）進(jìn)行均勻染色，控制染色時(shí)間與洗脫強(qiáng)度避免背景干擾；蛋白印跡膜采用封閉液封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，優(yōu)化一抗、二抗孵育條件確保信號(hào)特異性；微生物菌落樣本采用透明培養(yǎng)基培養(yǎng)，保證菌落形態(tài)完整且與培養(yǎng)基對(duì)比度適宜。
- 設(shè)備參數(shù)精準(zhǔn)調(diào)試：根據(jù)樣本類型與檢測(cè)目標(biāo)設(shè)置個(gè)性化成像參數(shù)。核酸凝膠檢測(cè)中，254nm波長(zhǎng)用于雙鏈DNA成像，激發(fā)強(qiáng)度調(diào)至80%以平衡靈敏度與背景；蛋白印跡檢測(cè)采用488nm激發(fā)波長(zhǎng)匹配熒光二抗，曝光時(shí)間根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度在0.1s-10s范圍內(nèi)動(dòng)態(tài)調(diào)整；菌落計(jì)數(shù)采用白光透射模式，調(diào)節(jié)焦距與光圈使菌落邊緣清晰。同時(shí)開啟設(shè)備“自動(dòng)背景校正”功能消除環(huán)境光干擾。
- 圖像分析規(guī)范建立：建立“標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)-區(qū)域選擇-數(shù)據(jù)校驗(yàn)”分析流程。定量分析前通過標(biāo)準(zhǔn)品繪制線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，核酸定量以已知濃度的λ-DNA為標(biāo)準(zhǔn)，蛋白定量以BSA標(biāo)準(zhǔn)品為參照；圖像分析時(shí)精準(zhǔn)選擇目標(biāo)區(qū)域，排除雜帶與背景干擾；對(duì)分析數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)性校驗(yàn)，確保定量結(jié)果的可靠性。
3.2 分場(chǎng)景應(yīng)用方案
3.2.1 分子克隆場(chǎng)景——核酸凝膠電泳成像與片段定量
應(yīng)用需求：分子克隆實(shí)驗(yàn)中，需對(duì)PCR產(chǎn)物、酶切片段進(jìn)行成像分析，明確片段大小與濃度，確保連接反應(yīng)中目的基因與載體的摩爾比適宜（通常為3:1），要求片段大小判定誤差≤5%，濃度定量誤差≤8%。方案配置：WD-9433A凝膠成像系統(tǒng)+紫外透射臺(tái)+1.0%瓊脂糖凝膠+核酸染料（GoldView）+λ-DNA標(biāo)準(zhǔn)品（100-10000bp）。操作步驟：① 制備1.0%瓊脂糖凝膠，加入GoldView染料（終濃度0.5μg/mL），將PCR產(chǎn)物（20μL）與標(biāo)準(zhǔn)品（5μL）分別點(diǎn)樣，120V電泳30min；② 開啟WD-9433A，選擇紫外透射模式，激發(fā)波長(zhǎng)254nm，激發(fā)強(qiáng)度80%，曝光時(shí)間1.5s，進(jìn)行成像；③ 利用配套軟件分析圖像，通過標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)注片段大小，繪制濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算PCR產(chǎn)物濃度。
3.2.2 蛋白印跡場(chǎng)景——目的蛋白成像與定量分析
應(yīng)用需求：蛋白印跡實(shí)驗(yàn)中，需檢測(cè)目的蛋白（如GAPDH、β-actin內(nèi)參蛋白）的表達(dá)量，評(píng)估藥物處理對(duì)蛋白表達(dá)的影響，要求目的蛋白條帶信號(hào)清晰，定量結(jié)果線性相關(guān)系數(shù)≥0.995，平行樣本相對(duì)偏差≤5%。方案配置：WD-9433A凝膠成像系統(tǒng)+熒光檢測(cè)模塊+PVDF膜+熒光二抗（Alexa Fluor 488標(biāo)記）+BSA標(biāo)準(zhǔn)品。操作步驟：① 蛋白樣本經(jīng)SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)印至PVDF膜，5%脫脂奶封閉1h，一抗（1:1000稀釋）4℃孵育過夜，熒光二抗（1:5000稀釋）室溫孵育1h；② 開啟WD-9433A熒光模式，激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm，曝光時(shí)間2.0s，進(jìn)行成像；③ 以BSA標(biāo)準(zhǔn)品（0.1-5μg）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，軟件分析目的蛋白條帶灰度值，計(jì)算蛋白表達(dá)量。
3.2.3 微生物實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景——菌落成像與自動(dòng)計(jì)數(shù)
應(yīng)用需求：微生物計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，需對(duì)平板菌落進(jìn)行精準(zhǔn)計(jì)數(shù)，評(píng)估樣品中微生物含量（如食品微生物檢測(cè)、環(huán)境微生物篩查），要求計(jì)數(shù)速度≤30s/平板，計(jì)數(shù)誤差≤3%，可區(qū)分直徑≥0.5mm的單菌落。方案配置：WD-9433A凝膠成像系統(tǒng)+白光反射臺(tái)+LB固體培養(yǎng)基平板+梯度稀釋的大腸桿菌菌液。操作步驟：① 將大腸桿菌菌液梯度稀釋（10??-10??），取100μL涂布于LB平板，37℃培養(yǎng)18h；② 開啟WD-9433A白光反射模式，調(diào)節(jié)焦距至菌落清晰，光圈5.6，曝光時(shí)間0.5s，進(jìn)行平板成像；③ 啟用軟件“自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)”功能，設(shè)置最小菌落直徑0.5mm，手動(dòng)修正重疊菌落與雜質(zhì)干擾，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。
