一、方案摘要

二、參考標(biāo)準(zhǔn)

• GB 14881-2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范》
• GB 4789.2-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》
• GB/T 38461-2020《食品從業(yè)人員手部衛(wèi)生規(guī)范》
• SN/T 3829-2014《國境口岸衛(wèi)生監(jiān)督技術(shù)規(guī)范 表面衛(wèi)生狀況評價》
• ISO 18593:2004《Food and animal feeding stuffs - Detection of microbial contamination using ATP bioluminescence》
• 3M TM ATP熒光檢測儀LM1操作手冊（編號：3M-LM1-OM-2023）
• QB/T 4850-2015《食品加工設(shè)備表面潔凈度的測定 熒光ATP法》
• FDA《Bacteriological Analytical Manual》(第9版，2021) 中表面微生物檢測方法

三、方案詳情

3.1 方案目標(biāo)

3.2 實驗原理

3.3 實驗儀器與試劑

3.3.1 儀器設(shè)備

• 核心儀器：美國3M ATP熒光檢測儀LM1（檢測范圍0-9999 RLU，檢測時間5-60秒可調(diào)，檢測精度±5% RLU，具備校準(zhǔn)功能與數(shù)據(jù)存儲功能，可存儲1000條檢測記錄）；
• 對照儀器/方法：生化培養(yǎng)箱（37℃±0.5℃）、恒溫恒濕培養(yǎng)箱（28℃±0.5℃，濕度85%±5%）、菌落計數(shù)器（精度±1 CFU），用于傳統(tǒng)菌落總數(shù)培養(yǎng)法檢測；
• 輔助設(shè)備：無菌操作臺（百級潔凈度）、電子天平（精度0.001 g）、移液器（10-1000 μL）、無菌規(guī)格板（5 cm×5 cm，面積25 cm²）、計時器（精度0.1秒）。

3.3.2 試劑與材料

• 檢測試劑：3M LM1專用ATP檢測拭子（批號：20240315，有效期12個月，內(nèi)含熒光素-熒光素酶體系）、ATP標(biāo)準(zhǔn)品（濃度10?¹²-10?? mol/L，純度≥99%）；
• 微生物菌株：大腸桿菌ATCC 25922、金黃色葡萄球菌ATCC 6538、釀酒酵母ATCC 9763，均由微生物菌種保藏中心提供，活化后制成10?-10? CFU/mL的菌懸液；
• 培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（用于細菌培養(yǎng)）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（用于酵母菌培養(yǎng)）、無菌生理鹽水（0.9%氯化鈉溶液）；
• 模擬樣本載體：食品級不銹鋼板（10 cm×10 cm，模擬設(shè)備表面）、聚乙烯板（10 cm×10 cm，模擬操作臺表面）、無菌紗布（模擬人員手部）；
• 其他材料：無菌手套、口罩、75%醫(yī)用酒精、無菌棉簽。

3.4 實驗方法

3.4.1 儀器校準(zhǔn)

3.4.2 模擬樣本檢測實驗

3.4.3 現(xiàn)場監(jiān)測實驗

3.4.4 性能評價指標(biāo)檢測

• 準(zhǔn)確性：以菌落總數(shù)培養(yǎng)法檢測結(jié)果為參照，計算LM1檢測RLU值與菌落數(shù)（CFU/cm²）的相關(guān)系數(shù)（R²），同時計算相對誤差（相對誤差=|RLU推導(dǎo)值-實際菌落數(shù)|/實際菌落數(shù)×100%）；
• 重復(fù)性：對同一濃度（10³ CFU/cm²）的大腸桿菌污染樣本連續(xù)檢測10次，計算RLU值的標(biāo)準(zhǔn)差（SD）與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）；
• 檢出限：將大腸桿菌菌懸液梯度稀釋，檢測LM1可識別的最小菌落濃度，以3次重復(fù)檢測均能與空白對照區(qū)分（RLU值＞空白對照3倍）的最低濃度為檢出限；
• 檢測效率：統(tǒng)計LM1與傳統(tǒng)培養(yǎng)法檢測單個樣本所需的時間（從樣本采集到結(jié)果輸出），計算效率提升比例；
• 現(xiàn)場適用性：分析現(xiàn)場監(jiān)測中LM1檢測結(jié)果的穩(wěn)定性，以及對污染區(qū)域的識別準(zhǔn)確率。

3.5 實驗結(jié)果與數(shù)據(jù)分析

3.5.1 準(zhǔn)確性實驗結(jié)果（與傳統(tǒng)方法比對）

3.5.2 重復(fù)性與檢出限實驗結(jié)果

3.5.3 現(xiàn)場監(jiān)測實驗結(jié)果

3.5.4 檢測效率對比結(jié)果

3.5.5 結(jié)果分析結(jié)論

3.6 質(zhì)量控制與注意事項

• 樣本采集控制：采集時需使用無菌規(guī)格板界定檢測區(qū)域，確保每次采集面積一致（25 cm²）；拭子擦拭力度需均勻（以載體表面不產(chǎn)生劃痕為宜），避免因采集量差異導(dǎo)致結(jié)果偏差；不同監(jiān)測點需使用獨立拭子，防止交叉污染。
• 儀器操作規(guī)范：檢測前必須按要求完成校準(zhǔn)，確保儀器處于正常工作狀態(tài)；拭子激活后需在1分鐘內(nèi)完成檢測，避免反應(yīng)試劑失效；檢測時需將拭子完全插入檢測孔，確保熒光信號被有效采集；儀器長期不用時，需每月開機校準(zhǔn)一次，保持光學(xué)系統(tǒng)穩(wěn)定性。
• 試劑與樣本管理：ATP檢測拭子需在2-8℃冷藏保存，使用前室溫平衡30分鐘，避免溫度波動影響反應(yīng)效率；過期拭子嚴(yán)禁使用；污染樣本需分類標(biāo)記，檢測后的拭子需按醫(yī)療廢棄物處理，避免二次污染。
• 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：需根據(jù)不同監(jiān)測點的衛(wèi)生要求制定分級判讀標(biāo)準(zhǔn)，建議食品加工環(huán)境表面RLU值≤100為合格，100-500為輕度污染，500-2000為中度污染，＞2000為嚴(yán)重污染；人員手部RLU值≤200為合格，確保判讀結(jié)果與實際衛(wèi)生風(fēng)險匹配。
• 干擾因素控制：檢測區(qū)域若存在強熒光物質(zhì)（如某些清潔劑殘留），需先用無菌生理鹽水擦拭干凈后再采集樣本；高濃度有機物（如油脂）可能抑制發(fā)光反應(yīng)，需采用專用脫脂拭子進行采集；環(huán)境溫度超過30℃時，需縮短樣本采集至檢測的間隔時間，避免ATP降解。
• 儀器維護與校準(zhǔn)：每天檢測結(jié)束后，用無菌棉簽蘸取75%酒精清潔檢測孔，去除殘留熒光物質(zhì)；每月使用ATP標(biāo)準(zhǔn)品進行一次性能驗證，確保檢出限與準(zhǔn)確性符合要求；每年聯(lián)系3M專業(yè)技術(shù)人員進行一次全面維護與校準(zhǔn)，更換老化的光學(xué)部件。
• 記錄管理：建立潔凈度監(jiān)測臺賬，詳細記錄監(jiān)測日期、時間、監(jiān)測點、操作人員、儀器校準(zhǔn)情況、RLU值、潔凈度評價及整改措施等信息，記錄保存期不少于2年，便于食品安全追溯與衛(wèi)生管理體系審核。