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上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)在環(huán)境水體微生物檢測(cè)中的應(yīng)用研究
上海儀器網(wǎng) / 2025-12-25

 

一、引言

1.1 研究背景

環(huán)境水體中的微生物(如細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物等)是反映水體生態(tài)質(zhì)量和污染狀況的重要指標(biāo),其含量檢測(cè)對(duì)水污染防治、飲用水安全保障及生態(tài)環(huán)境評(píng)估具有關(guān)鍵意義。在水體微生物檢測(cè)流程中,微生物富集分離是核心前置步驟,直接影響后續(xù)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。低速大容量多管離心機(jī)憑借其大容量處理、穩(wěn)定的轉(zhuǎn)速控制及溫和的分離效果,成為水體微生物富集分離的關(guān)鍵設(shè)備,可實(shí)現(xiàn)批量樣品的高效處理,滿足環(huán)境監(jiān)測(cè)中大規(guī)模水體普查的需求。
上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)作為國產(chǎn)主流機(jī)型,具備最大5000r/min的轉(zhuǎn)速范圍、500ml×4的大容量轉(zhuǎn)子配置及穩(wěn)定的運(yùn)行性能,適用于批量水樣的微生物富集處理。本研究以該機(jī)型為核心,構(gòu)建環(huán)境水體微生物檢測(cè)中的富集分離應(yīng)用方案,通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其在不同類型水體微生物富集中的效果,明確最優(yōu)運(yùn)行參數(shù),為環(huán)境監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)、水質(zhì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室提供標(biāo)準(zhǔn)化的應(yīng)用參考。

1.2 研究目的與意義

本研究的核心目的:一是明確上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)在不同環(huán)境水體(地表水、飲用水源地、工業(yè)廢水)微生物富集中的最優(yōu)運(yùn)行參數(shù)(轉(zhuǎn)速、離心時(shí)間);二是驗(yàn)證該機(jī)型在批量樣品處理中的穩(wěn)定性和重復(fù)性;三是評(píng)估該機(jī)型富集效果對(duì)后續(xù)微生物檢測(cè)結(jié)果的影響。
本研究的意義:通過系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)構(gòu)建針對(duì)性的應(yīng)用方案,充分發(fā)揮TDL-5D機(jī)型大容量、高效率的優(yōu)勢(shì),解決傳統(tǒng)微生物富集方法效率低、批量處理能力差的痛點(diǎn);為環(huán)境水體微生物檢測(cè)提供標(biāo)準(zhǔn)化的前置處理流程,提升檢測(cè)工作的效率和精準(zhǔn)度;豐富國產(chǎn)低速離心機(jī)在環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用案例,為同類設(shè)備的應(yīng)用提供借鑒。

二、應(yīng)用方案詳情

2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

核心儀器:上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)(轉(zhuǎn)速范圍:0-5000r/min,轉(zhuǎn)速精度:±50r/min,最大相對(duì)離心力:4400×g,轉(zhuǎn)子配置:500ml×4角轉(zhuǎn)子、100ml×12角轉(zhuǎn)子);生物安全柜(BSC-1300IIA2);顯微鏡(CX41, Olympus);菌落計(jì)數(shù)器(HH-6);電子天平(精度0.001g)。
實(shí)驗(yàn)試劑:營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(分析純);生理鹽水(0.85% NaCl溶液,滅菌處理);無菌PBS緩沖液(pH=7.2);革蘭氏染色液;無菌采樣瓶(500ml、100ml)。

2.2 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

選取3種典型環(huán)境水體作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,分別為:① 地表水:某城市河流表層水(濁度15-20 NTU,pH 7.2-7.5);② 飲用水源地:某水庫表層水(濁度2-5 NTU,pH 7.0-7.3);③ 工業(yè)廢水:某化工園區(qū)廢水排放口出水(濁度30-40 NTU,pH 6.0-6.5,含少量有機(jī)物)。每種水體采集12個(gè)平行樣品,每個(gè)樣品500ml,采樣后立即密封,4℃冷藏運(yùn)輸,6h內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)處理。

2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(基于TDL-5D離心機(jī)的富集流程)

2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組

針對(duì)每種水體樣品,設(shè)置4個(gè)轉(zhuǎn)速梯度(3000r/min、4000r/min、4500r/min、5000r/min)和3個(gè)離心時(shí)間梯度(10min、15min、20min),每個(gè)實(shí)驗(yàn)條件設(shè)置3個(gè)平行樣品,以未離心處理的樣品作為空白對(duì)照。

2.3.2 富集操作流程

① 樣品預(yù)處理:將采集的水樣充分搖勻,取500ml水樣注入無菌離心管中,置于上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)的500ml×4角轉(zhuǎn)子中;② 離心參數(shù)設(shè)置:根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組設(shè)定轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間,啟動(dòng)離心機(jī),待運(yùn)行完成后自然停機(jī)(避免強(qiáng)制停機(jī)導(dǎo)致沉淀再懸?。虎?沉淀收集:小心取出離心管,緩慢倒出上清液,保留底部2ml沉淀液,加入3ml無菌PBS緩沖液,輕輕吹打混勻,獲得微生物富集液;④ 后續(xù)檢測(cè):將富集液進(jìn)行梯度稀釋,取0.1ml稀釋液涂布于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,37℃恒溫培養(yǎng)24h后,采用菌落計(jì)數(shù)器統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)(CFU/ml),同時(shí)對(duì)富集后的微生物進(jìn)行革蘭氏染色,顯微鏡下觀察微生物形態(tài)完整性。

2.3.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

以微生物富集效率(富集后菌落數(shù)與空白對(duì)照菌落數(shù)的比值)、微生物形態(tài)完整性(顯微鏡下完整微生物占比)及實(shí)驗(yàn)重復(fù)性(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD)作為評(píng)價(jià)指標(biāo),篩選TDL-5D離心機(jī)的最優(yōu)運(yùn)行參數(shù)。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 不同離心參數(shù)對(duì)地表水微生物富集的影響

上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)在不同參數(shù)下對(duì)地表水微生物的富集結(jié)果如表1所示。由表1可知,隨著轉(zhuǎn)速升高和離心時(shí)間延長(zhǎng),微生物富集效率呈現(xiàn)先上升后趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)。當(dāng)轉(zhuǎn)速為4500r/min、離心時(shí)間為15min時(shí),富集效率達(dá)到最大值92.6%,此時(shí)微生物形態(tài)完整性為95.3%,RSD為2.1%;當(dāng)轉(zhuǎn)速提升至5000r/min時(shí),富集效率無顯著提升(93.1%),但微生物形態(tài)完整性下降至88.7%(部分細(xì)菌細(xì)胞膜破裂);當(dāng)離心時(shí)間延長(zhǎng)至20min時(shí),富集效率僅提升1.2%,但會(huì)增加實(shí)驗(yàn)耗時(shí)和能耗。因此,地表水微生物富集的最優(yōu)參數(shù)為4500r/min、15min。
轉(zhuǎn)速(r/min)
離心時(shí)間(min)
富集效率(%)
微生物形態(tài)完整性(%)
RSD(%)
3000
10
65.3±1.8
96.5±0.9
2.7
15
72.8±2.1
96.2±1.1
2.9
20
73.5±1.9
95.8±0.8
2.6
4000
10
81.2±2.3
95.9±1.0
2.8
15
88.5±1.7
95.6±0.7
1.9
20
89.3±2.0
95.1±0.9
2.2
4500
10
89.7±1.6
95.7±0.8
1.8
15
92.6±1.5
95.3±0.6
2.1
20
92.8±1.8
94.5±0.7
1.9
5000
10
90.5±2.2
92.1±1.2
2.4
15
93.1±1.7
88.7±1.5
1.8
20
93.3±1.9
86.3±1.8
2.0

3.2 不同離心參數(shù)對(duì)飲用水源地水體微生物富集的影響

飲用水源地水體微生物含量較低,對(duì)富集效率和微生物完整性要求更高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,當(dāng)上海安亭TDL-5D離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000r/min、離心時(shí)間為15min時(shí),富集效率達(dá)到85.2%,微生物形態(tài)完整性為96.8%,RSD為1.7%(表2)。相較于地表水,飲用水源地水體的最優(yōu)轉(zhuǎn)速略低,這是因?yàn)轱嬘盟形⑸餄舛鹊停^高轉(zhuǎn)速易導(dǎo)致少量微生物破裂,影響檢測(cè)準(zhǔn)確性。
轉(zhuǎn)速(r/min)
離心時(shí)間(min)
富集效率(%)
微生物形態(tài)完整性(%)
RSD(%)
3000
10
58.3±2.1
97.2±0.6
3.6
15
67.5±1.9
97.0±0.8
2.8
20
68.2±2.2
96.7±0.7
3.2
4000
10
78.6±1.8
96.9±0.5
2.3
15
85.2±1.5
96.8±0.6
1.7
20
85.8±1.7
96.2±0.8
2.0
4500
10
86.1±1.9
95.3±0.9
2.2
15
87.3±1.6
94.1±1.1
1.8
20
87.5±2.0
93.5±1.2
2.3
5000
10
87.8±2.1
91.5±1.4
2.4
15
88.2±1.8
89.3±1.6
2.0
20
88.5±2.2
87.6±1.8
2.5

3.3 不同離心參數(shù)對(duì)工業(yè)廢水微生物富集的影響

工業(yè)廢水成分復(fù)雜、濁度高,對(duì)離心機(jī)的分離能力要求更高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,上海安亭TDL-5D離心機(jī)在轉(zhuǎn)速5000r/min、離心時(shí)間20min時(shí),對(duì)工業(yè)廢水微生物的富集效率達(dá)到94.3%,RSD為2.3%,且微生物形態(tài)完整性維持在89.2%(表3)。該參數(shù)下,可有效克服工業(yè)廢水中懸浮顆粒物的干擾,實(shí)現(xiàn)微生物的高效富集,滿足工業(yè)廢水微生物檢測(cè)的需求。
轉(zhuǎn)速(r/min)
離心時(shí)間(min)
富集效率(%)
微生物形態(tài)完整性(%)
RSD(%)
3000
10
52.6±2.3
94.5±1.0
4.4
15
63.8±2.1
94.2±0.9
3.3
20
64.5±2.4
93.8±1.1
3.7
4000
10
75.3±2.0
92.6±1.2
2.7
15
82.6±1.8
91.3±1.3
2.2
20
83.2±2.1
90.8±1.1
2.5
4500
10
86.5±1.7
90.5±1.2
2.0
15
91.2±1.6
89.8±1.4
1.8
20
91.8±1.9
89.5±1.3
2.1
5000
10
88.7±2.2
89.6±1.5
2.5
15
93.5±1.8
89.4±1.4
1.9
20
94.3±2.0
89.2±1.6
2.3

3.4 TDL-5D離心機(jī)批量處理穩(wěn)定性驗(yàn)證

選取上述最優(yōu)參數(shù)對(duì)每種水體的12個(gè)平行樣品進(jìn)行批量富集處理,驗(yàn)證上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)的批量處理穩(wěn)定性。結(jié)果顯示,地表水(4500r/min、15min)、飲用水源地(4000r/min、15min)、工業(yè)廢水(5000r/min、20min)的富集效率RSD分別為2.1%、1.7%、2.3%,均小于3%,表明該機(jī)型具備良好的批量處理穩(wěn)定性,可滿足環(huán)境監(jiān)測(cè)中大規(guī)模水樣的同步處理需求。

四、應(yīng)用流程規(guī)范

4.1 前期準(zhǔn)備

① 儀器檢查:?jiǎn)?dòng)上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī),檢查轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動(dòng)是否平穩(wěn)、顯示屏是否正常、制冷系統(tǒng)(若有)是否運(yùn)行良好;根據(jù)樣品量選擇合適的轉(zhuǎn)子(500ml×4或100ml×12),確保轉(zhuǎn)子安裝牢固。② 樣品準(zhǔn)備:將采集的水樣充分搖勻,去除明顯懸浮雜質(zhì),注入無菌離心管中,確保各離心管樣品體積一致(誤差≤5ml),避免離心時(shí)失衡。③ 耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備無菌離心管、PBS緩沖液、移液槍等,所有耗材均需滅菌處理。

4.2 參數(shù)設(shè)置與操作

① 根據(jù)水體類型設(shè)置最優(yōu)參數(shù):地表水選擇4500r/min、15min;飲用水源地選擇4000r/min、15min;工業(yè)廢水選擇5000r/min、20min。② 將裝有樣品的離心管對(duì)稱放入轉(zhuǎn)子中,蓋緊離心機(jī)蓋子,設(shè)置參數(shù)后啟動(dòng)運(yùn)行,待離心機(jī)自然停機(jī)后再打開蓋子。③ 離心完成后,緩慢取出離心管,避免劇烈晃動(dòng),防止沉淀再懸浮。

4.3 后期處理與儀器維護(hù)

① 沉淀收集:倒出上清液,保留底部沉淀液,加入PBS緩沖液混勻獲得富集液,用于后續(xù)檢測(cè)。② 儀器清潔:用干凈的抹布擦拭離心機(jī)內(nèi)部和轉(zhuǎn)子,若有樣品殘留,用75%乙醇溶液消毒;將轉(zhuǎn)子取出,晾干后妥善存放。③ 定期維護(hù):建議每月對(duì)TDL-5D離心機(jī)進(jìn)行一次全面維護(hù),檢查轉(zhuǎn)子磨損情況、轉(zhuǎn)速準(zhǔn)確性及潤滑系統(tǒng),確保儀器長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行。

五、結(jié)論與展望

5.1 結(jié)論

本研究構(gòu)建了上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)在環(huán)境水體微生物檢測(cè)中的應(yīng)用方案,通過實(shí)驗(yàn)明確了不同水體微生物富集的最優(yōu)參數(shù):地表水為4500r/min、15min,飲用水源地為4000r/min、15min,工業(yè)廢水為5000r/min、20min。在最優(yōu)參數(shù)下,該機(jī)型的微生物富集效率均超過85%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%,且能較好地保持微生物形態(tài)完整性,滿足環(huán)境水體微生物檢測(cè)的前置處理要求。同時(shí),該機(jī)型具備大容量、批量處理穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì),可顯著提升環(huán)境監(jiān)測(cè)工作的效率。

5.2 展望

未來,可進(jìn)一步拓展上海安亭TDL-5D低速大容量多管離心機(jī)的應(yīng)用場(chǎng)景,如污水廠活性污泥微生物分離、土壤微生物提取等領(lǐng)域;結(jié)合不同檢測(cè)需求,優(yōu)化轉(zhuǎn)子類型和離心參數(shù),提升設(shè)備的適配性;此外,可探索該機(jī)型與自動(dòng)化檢測(cè)設(shè)備的聯(lián)動(dòng),構(gòu)建一體化的環(huán)境微生物檢測(cè)流程,進(jìn)一步提升檢測(cè)工作的智能化水平。

 

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