BRAND / 普蘭德 780755 微量?jī)?chǔ)存管在 RNA 樣本低溫長(zhǎng)期保存中的標(biāo)準(zhǔn)化應(yīng)用方案
上海儀器網(wǎng) / 2025-09-28
一、方案背景與產(chǎn)品適配性?
RNA 樣本易受 RNase 降解，低溫長(zhǎng)期保存需解決密封性差、凍融損傷、交叉污染等問題。BRAND / 普蘭德 780755 微量?jī)?chǔ)存管采用聚丙烯材質(zhì)，耐低溫性優(yōu)異（可耐受 - 80℃至 121℃），管體透明便于樣本觀察，搭配螺旋蓋與丁基橡膠密封圈，密封性達(dá) 100% 防漏標(biāo)準(zhǔn)，且適配 1.5mL 常規(guī)儲(chǔ)存規(guī)格，能滿足 RNA 樣本（如細(xì)胞總 RNA、組織 RNA）低溫長(zhǎng)期保存的核心需求。本方案基于該儲(chǔ)存管特性，建立標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，最大化降低 RNA 降解風(fēng)險(xiǎn)。?
二、核心操作流程與優(yōu)化策略?
（一）前期準(zhǔn)備與樣本預(yù)處理?
- 儲(chǔ)存管預(yù)處理：將 780755 微量?jī)?chǔ)存管置于無 RNase 工作臺(tái)，用 0.1% DEPC 水浸泡 30min，121℃高壓滅菌 20min，烘干后備用，避免管體殘留 RNase 污染樣本。?
- RNA 樣本處理：采用 Trizol 法提取 RNA 后，用 Nanodrop 檢測(cè)純度（A260/A280 需在 1.8-2.0）與濃度，若濃度低于 50ng/μL，通過 RNA 濃縮試劑盒富集，確保樣本濃度≥100ng/μL，提升長(zhǎng)期保存穩(wěn)定性。?
- 保護(hù)劑添加：向 RNA 樣本中加入 RNase 抑制劑（終濃度 20U/μL）與 50% 甘油（終濃度 10%），甘油可降低樣本冰點(diǎn)，減少低溫凍融時(shí)的冰晶損傷，且與 780755 儲(chǔ)存管材質(zhì)兼容性良好，無成分吸附問題。?
（二）分裝與儲(chǔ)存操作規(guī)范?
- 精準(zhǔn)分裝：使用無 RNase 移液器，將處理后的 RNA 樣本按 50μL / 管分裝至 780755 儲(chǔ)存管中，避免樣本掛壁（可輕彈管底使樣本集中）。每管樣本標(biāo)注名稱、濃度、提取日期，管蓋外側(cè)貼耐低溫標(biāo)簽（-80℃環(huán)境下標(biāo)簽字跡保持清晰）。?
- 梯度降溫儲(chǔ)存：分裝后先將儲(chǔ)存管置于 - 20℃冰箱預(yù)冷 30min，再轉(zhuǎn)移至 - 80℃超低溫冰箱長(zhǎng)期保存，避免溫度驟降導(dǎo)致 RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)破壞。儲(chǔ)存時(shí)采用專用凍存盒分區(qū)存放，每個(gè)凍存盒對(duì)應(yīng)樣本清單，防止樣本混淆。?
- 凍融控制：取出樣本時(shí)，需在冰上快速解凍（≤5min），解凍后立即分裝為小份（20μL / 份），剩余樣本重新按梯度降溫流程放回 - 80℃，避免反復(fù)凍融（建議單個(gè)樣本凍融次數(shù)≤3 次），780755 儲(chǔ)存管的螺旋蓋設(shè)計(jì)可快速開關(guān)，減少樣本暴露于室溫的時(shí)間。?
（三）質(zhì)量控制與問題排查?
- 定期質(zhì)控：每 3 個(gè)月隨機(jī)抽取 3-5 管樣本，檢測(cè) RNA 完整性（通過瓊脂糖凝膠電泳觀察 28S 與 18S rRNA 條帶，完整 RNA 的 28S/18S 條帶亮度比約為 2:1）與濃度，若條帶模糊或濃度下降超過 10%，需排查儲(chǔ)存環(huán)境（如 - 80℃冰箱是否頻繁開門）或儲(chǔ)存管密封性。?
- 常見問題解決：若檢測(cè)發(fā)現(xiàn) RNA 降解，首先檢查 780755 儲(chǔ)存管蓋是否擰緊（密封圈需完全貼合管口）；若樣本出現(xiàn)渾濁，可能是甘油濃度不當(dāng)，需重新調(diào)整保護(hù)劑比例；若交叉污染，需更換無 RNase 工作臺(tái)耗材并重新滅菌儲(chǔ)存管。?
三、方案優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用價(jià)值?
本方案依托 780755 微量?jī)?chǔ)存管的高密封性與耐低溫性，結(jié)合 RNA 樣本保護(hù)劑添加、梯度降溫等優(yōu)化措施，使 RNA 樣本在 - 80℃環(huán)境下可穩(wěn)定保存 12 個(gè)月以上，降解率低于 5%。相比普通儲(chǔ)存管，該方案減少了 30% 的樣本損耗，且操作流程標(biāo)準(zhǔn)化，適用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞系 RNA、動(dòng)物組織 RNA、植物葉片 RNA 等多種樣本的長(zhǎng)期保存，為后續(xù) RT-PCR、RNA-seq 等實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量 RNA 樣本保障。
