基于 GL-16G-C 冷凍離心機(jī)的微生物菌種富集與純化實(shí)驗(yàn)方案
上海儀器網(wǎng) / 2025-09-30
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>?
利用上海安亭 GL-16G-C 冷凍離心機(jī)的低溫控溫（-20℃~40℃）與可調(diào)轉(zhuǎn)速（最高 16000r/min）功能，實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品（如土壤、水體、食品）中目標(biāo)微生物的富集分離與純化，獲得高活性、單一菌株的純培養(yǎng)物，為后續(xù)菌種鑒定、功能研究提供基礎(chǔ)。?
二、實(shí)驗(yàn)原理?
通過選擇性培養(yǎng)基對(duì)樣品中的目標(biāo)微生物進(jìn)行初步富集，抑制雜菌生長(zhǎng)；再利用 GL-16G-C 冷凍離心機(jī)的離心力差異，分離微生物與樣品雜質(zhì)（如土壤顆粒、細(xì)胞碎片），降低雜菌干擾；最后結(jié)合平板劃線法，實(shí)現(xiàn)單一菌種的純化，全程低溫環(huán)境可減少微生物活性損失。?
三、實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備?
1. 實(shí)驗(yàn)材料?
- 樣品：土壤（取 5-10cm 表層土）、水體（河流 / 湖泊水樣，經(jīng) 0.45μm 濾膜過濾）或食品（如發(fā)酵食品勻漿）；?
- 培養(yǎng)基：目標(biāo)微生物選擇性培養(yǎng)基（如大腸桿菌用 LB 培養(yǎng)基、乳酸菌用 MRS 培養(yǎng)基）、無菌生理鹽水（0.85% NaCl）；?
- 其他：無菌離心管（50mL）、無菌移液管（1mL/10mL）、無菌培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱（37℃）。?
2. 核心設(shè)備?
- 上海安亭 GL-16G-C 冷凍離心機(jī)（配備 50mL 轉(zhuǎn)子，需提前校準(zhǔn)轉(zhuǎn)速與溫度）；?
- 超凈工作臺(tái)（確保無菌操作環(huán)境）。?
四、實(shí)驗(yàn)步驟?
1. 樣品預(yù)處理與微生物富集?
- 稱取 10g 土壤樣品（或取 10mL 水樣 / 食品勻漿），加入 90mL 無菌生理鹽水中，振蕩搖勻（200r/min，30min），制成 10?¹ 樣品稀釋液；?
- 取 10mL 10?¹ 稀釋液，加入 90mL 選擇性培養(yǎng)基中，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱，振蕩培養(yǎng)（180r/min）12-24h，完成目標(biāo)微生物富集。?
2. 基于 GL-16G-C 冷凍離心機(jī)的分離操作?
- 離心機(jī)預(yù)熱與參數(shù)設(shè)定：打開 GL-16G-C 冷凍離心機(jī)，設(shè)定溫度為 4℃（保護(hù)微生物活性），轉(zhuǎn)速為 8000r/min，離心時(shí)間為 10min，啟動(dòng)預(yù)熱，待溫度穩(wěn)定至 4℃后備用；?
- 樣品分裝：在超凈工作臺(tái)中，將富集后的菌液分裝至無菌 50mL 離心管，每管裝液量不超過 30mL（避免離心時(shí)液體溢出），平衡各離心管重量（誤差≤0.5g）；?
- 離心操作：將平衡后的離心管對(duì)稱放入離心機(jī)轉(zhuǎn)子中，蓋緊離心機(jī)蓋，確認(rèn)參數(shù)無誤后啟動(dòng)離心程序；?
- 上清液收集：離心結(jié)束后，待轉(zhuǎn)子完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)，打開離心機(jī)蓋，取出離心管，此時(shí)管底為雜質(zhì)沉淀（如土壤顆粒、死菌），上層為含目標(biāo)微生物的上清液，用無菌移液管吸取上清液至新的無菌離心管中，棄去沉淀。?
3. 菌種純化與培養(yǎng)?
- 取上述上清液，用無菌生理鹽水梯度稀釋至 10?³~10??濃度（根據(jù)微生物豐度調(diào)整）；?
- 分別取 0.1mL 不同稀釋度的菌液，滴加至選擇性培養(yǎng)基平板上，用涂布棒均勻涂布；?
- 將平板倒置，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 12-24h，直至出現(xiàn)單菌落；?
- 用無菌接種環(huán)挑取形態(tài)一致的單菌落，接種至新鮮的選擇性培養(yǎng)基斜面，37℃培養(yǎng) 12h，獲得純培養(yǎng)菌種，可用于后續(xù)鑒定或保藏。?
五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?
- 離心機(jī)操作安全：離心前必須確保離心管重量平衡，轉(zhuǎn)子蓋擰緊，避免離心時(shí)轉(zhuǎn)子偏移；離心過程中若出現(xiàn)異常震動(dòng)或噪音，需立即停機(jī)檢查；?
- 溫度控制：針對(duì)對(duì)溫度敏感的微生物（如乳酸菌），可將離心機(jī)溫度設(shè)定為 2℃~4℃，避免高溫導(dǎo)致菌種失活；?
- 無菌操作：樣品分裝、上清液收集、平板涂布等步驟需在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，避免雜菌污染，影響純化效果；?
- 參數(shù)調(diào)整：若樣品中雜質(zhì)較多（如高黏土含量土壤），可適當(dāng)提高轉(zhuǎn)速至 10000r/min，延長(zhǎng)離心時(shí)間至 15min，確保雜質(zhì)充分沉淀。?
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證?
- 純度驗(yàn)證：取純化后的菌種，進(jìn)行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察，若菌體形態(tài)一致，無雜菌，說明純化成功；?
- 活性驗(yàn)證：將純化菌種接種至選擇性培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng) 12h，觀察生長(zhǎng)情況，若菌落形態(tài)均一、生長(zhǎng)旺盛，說明菌種活性良好。?
