|
參數(shù)項(xiàng)
|
優(yōu)化方案
|
傳統(tǒng)離心柱法對(duì)照
|
|---|---|---|
|
樣品來源
|
臨床咽拭子樣品60份（陽性20份、陰性40份，病毒載量10²-10? copies/mL）
|
同批次平行樣品
|
|
最優(yōu)提取參數(shù)
|
裂解溫度65℃、裂解時(shí)間10min，磁珠用量20μL，洗脫體積50μL，熱蓋溫度105℃
|
按試劑盒說明書操作（裂解30min，洗脫50μL）
|
|
驗(yàn)證指標(biāo)
|
核酸濃度（Nanodrop 2000）、PCR擴(kuò)增Ct值、陽性檢出率、重復(fù)性（n=6）
|
同左側(cè)驗(yàn)證指標(biāo)
|
|
樣品類型
|
提取方法
|
平均核酸濃度（ng/μL）
|
平均Ct值
|
陽性檢出率（%）
|
RSD（%）
|
單次提取時(shí)間（min）
|
|---|---|---|---|---|---|---|
|
高載量陽性樣品（10?-10? copies/mL）
|
TNE-9600Plus
|
1.82±0.04
|
23.56±0.32
|
100
|
1.23
|
32
|
|
高載量陽性樣品（10?-10? copies/mL）
|
離心柱法
|
1.48±0.06
|
25.12±0.45
|
100
|
2.15
|
120
|
|
低載量陽性樣品（10²-10³ copies/mL）
|
TNE-9600Plus
|
0.35±0.01
|
34.28±0.51
|
100
|
2.28
|
32
|
|
低載量陽性樣品（10²-10³ copies/mL）
|
離心柱法
|
0.28±0.02
|
37.85±0.63
|
85
|
3.89
|
120
|
|
陰性樣品
|
TNE-9600Plus
|
0.08±0.01
|
無擴(kuò)增
|
0
|
-
|
32
|
|
陰性樣品
|
離心柱法
|
0.09±0.02
|
無擴(kuò)增
|
0
|
-
|
120
|
|
參數(shù)項(xiàng)
|
雞肉樣品
|
牛奶樣品
|
|---|---|---|
|
樣品處理
|
均質(zhì)后取25g樣品，加入225mL緩沖液增菌6小時(shí)，取1mL增菌液用于提取
|
取10mL樣品，加入90mL緩沖液增菌6小時(shí)，取1mL增菌液用于提取
|
|
最優(yōu)提取參數(shù)
|
裂解溫度75℃、裂解時(shí)間12min，磁珠用量25μL，洗脫體積60μL
|
裂解溫度70℃、裂解時(shí)間10min，磁珠用量20μL，洗脫體積60μL
|
|
國標(biāo)對(duì)比方法
|
GB 4789.42-2020增菌培養(yǎng)法（24小時(shí)增菌+生化鑒定）
|
同雞肉方法
|
|
靈敏度驗(yàn)證
|
人工污染沙門氏菌（10¹-10? CFU/g），計(jì)算檢出限
|
人工污染沙門氏菌（10¹-10? CFU/mL），計(jì)算檢出限
|
|
樣品類型
|
污染濃度（CFU/g/mL）
|
TNE-9600Plus檢出率（%）
|
國標(biāo)方法檢出率（%）
|
平均提取濃度（ng/μL）
|
RSD（%）
|
總檢測時(shí)間（h）
|
|---|---|---|---|---|---|---|
|
雞肉
|
10?
|
100
|
100
|
2.15±0.05
|
1.42
|
7.5
|
|
雞肉
|
10²
|
100
|
100
|
0.42±0.02
|
2.08
|
7.5
|
|
雞肉
|
10¹
|
90
|
85
|
0.11±0.01
|
2.27
|
7.5
|
|
牛奶
|
10?
|
100
|
100
|
1.98±0.04
|
1.31
|
7.2
|
|
牛奶
|
10²
|
100
|
100
|
0.38±0.01
|
1.84
|
7.2
|
|
牛奶
|
10¹
|
92
|
88
|
0.10±0.01
|
2.15
|
7.2
|
